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如何用生物显微镜测量细胞的大小?

为了让广大客户熟悉使用生物显微镜计算测量生物细胞的大小方法,技术室特意用奥林巴斯显微镜做了详细讲解。

??? 我们应用生物显微镜的成像原理,同时借助奥林巴斯显微镜的镜台测微尺和目镜测微尺,两尺配合使用,进行测量和运算,得出细胞的大小。
??? 镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的载玻片。一般将1mm等分为100格(或2mm等分为200格),每格长度等于0.01mm(即10um)。是专用于校正目镜测微尺每格长度的。
??? 目镜测微尺是一块可放在目镜筒内的隔板上的圆形小玻片,其中央刻有精确的刻度,有等分50小格或100小格两种,每5小格间有一长线相隔。由于所用目镜放大倍数和物镜放大倍数的不同,目镜测微尺每小格所代表的实际长度也就不同,因此,目镜测微尺不能直接用来测量微生物的大小,在使用前必须用镜台测微尺进行校正,以求得在一定放大倍数的目镜和物镜下该目镜测微尺每小格的相对值,然后才可用来测量微生物的大小。
奥林巴斯常用目镜测微尺
1.目镜测微尺的标定
??? 1)放置目镜测微尺取出目镜,旋开目镜透镜,将目镜测微尺的刻度朝下放在目镜筒内的隔板上,然后旋上目镜,最后将此目镜插入镜筒内。
??? 2)放置镜台测微尺将镜台测微尺置于生物显微镜的载物台上,使刻皮面朝上。
??? 3)校正目镜测微尺先用低倍镜观察,对准焦距,当看清镜台测微尺后,转动目镜,使目镜测微尺的刻度与镜台测微尺的刻度平行,移动载物台,使目镜测微尺和镜台测微尺的某一区间的两对刻度线完全重合,然后计数出两对重合线之间各自所占的格数。
??? 根据计数得到的目镜测微尺和镜台测微尺重合线之间各自所占的格数,通过如下公式换算出目镜测微尺每小格所代表的实际长度。
??? 目镜测微尺每小格长度(um)=镜台测微尺的格数/目镜测微尺的格数×10
??? 同法校正在高倍镜和油镜下目镜测微尺每小格所代表的长度。
2.鸭血细胞大小的测定
??? 1)将已经制备好的鸭血涂片放在染色盘架上,滴数滴瑞氏-吉姆萨染液于涂片上,静置染色1分钟,滴加等量1/15mol/L磷酸缓冲液,用牙签轻轻搅拌混匀,再静置染色5-10分钟,最后用清水缓缓冲洗1分钟,倾斜放量,晾干后进行观察测量。
??? 2)目镜测微尺校正后,移去镜台测微尺,换上鸭血涂片,校正焦距使细胞清晰,转动目镜测微尺(或转动染色标本),测出鸭血细胞的长和宽各占几小格,将测得的格数乘以目镜测微尺每小格所代表的长度,即可换算出此单个细胞的大小值。
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