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基因敲除以及HPLC的问题

新手求助对基因敲除以及HPLC熟知的高手

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我敲掉了一个基因,发现这种链霉菌还是产抗生素,现在的问题是:这个基因的敲除株与野生株对比之后虽然还是产抗生素,但不知道有没有量的变化,如果可以定量的话就可以分析一下,但现在不知道怎么定量?

我只是做了一个HPLC,发现在特定的保留时间下还是出峰了,不知道怎么定量所以只是看了一下有峰,初步判定还是产抗生素,但不是不知道可比可以定量分析

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可以定量. 相同的条件, 如果峰面积相同, 则表达量没有变化. 对应的峰面积就代表产量.

基因敲除以及HPLC的问题

看峰面积吧,要保证各种处理方法都相同的,不过感觉不是很准

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从产物量上来比较,色谱峰面积可以定量,但是准确性不高,你要设置一个内参或是标准样,但整体比较难!我建议可以用RTPCR在相关基因表达水平上进行定量,发文章时肯定得有这方面的数据!

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你做一个标准样品,比如购买一个它产生的抗生素,之后做一个标曲,再同样条件下,做你的野生株和突变株,就可以根据峰面积和响应值做定量 了

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积分看峰面积吧 买标样 打标方 然后对比出峰时间 不是很准

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